低速離心機是實驗室中分離液體混合物(如細胞沉淀、組織勻漿)的常用設(shè)備,正確操作需結(jié)合轉(zhuǎn)速、時間與轉(zhuǎn)子類型三要素,以確保分離效果并避免設(shè)備損壞。以下是具體指南:
一、轉(zhuǎn)速選擇:平衡分離需求與樣品安全
根據(jù)樣品類型設(shè)定轉(zhuǎn)速
細胞沉淀:通常選擇800-1500×g(相對離心力),如分離哺乳動物細胞(如HeLa細胞)時,1000×g離心5分鐘即可使細胞沉降至管底。
組織碎片:需更高轉(zhuǎn)速(2000-3000×g),例如分離肝臟勻漿中的細胞核時,2500×g離心10分鐘可有效沉淀大顆粒碎片。
輕質(zhì)顆粒(如外泌體):需低速(500-800×g)結(jié)合長時間離心,避免顆粒破裂。
避免超速運行
低速離心機轉(zhuǎn)子設(shè)計有最大轉(zhuǎn)速限制(如4000rpm對應(yīng)約2000×g),超速可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)子變形或破裂。使用前需核對轉(zhuǎn)子銘牌標注的最大轉(zhuǎn)速(RCF),而非僅參考電機轉(zhuǎn)速(rpm)。
二、時間設(shè)定:匹配轉(zhuǎn)速與分離目標
短時間離心(1-5分鐘):適用于快速沉淀大顆粒(如血細胞、酵母細胞),但可能殘留細小碎片。
長時間離心(10-30分鐘):用于分離微小顆粒(如病毒顆粒、細胞器)或需高純度沉淀的場景。
梯度離心優(yōu)化:若需分離不同密度組分(如密度梯度離心法分離細胞器),需分階段設(shè)定轉(zhuǎn)速與時間(如先低速離心去除大碎片,再高速離心分離目標組分)。
三、轉(zhuǎn)子選擇:適配樣品量與容器類型
固定角轉(zhuǎn)子:適用于高容量樣品(如50mL離心管),但沉淀顆粒集中于管底側(cè)壁,需調(diào)整取樣位置。
水平轉(zhuǎn)子(擺桶轉(zhuǎn)子):沉淀顆粒均勻分布于管底,適合需要平鋪沉淀的場景(如DNA提取后的乙醇沉淀)。
微量離心轉(zhuǎn)子:適配0.2mL或1.5mL離心管,用于小體積樣品(如PCR反應(yīng)液)的快速分離。
四、操作注意事項
對稱平衡:離心管需按轉(zhuǎn)子要求對稱放置,質(zhì)量誤差不超過0.1g,避免振動損壞設(shè)備。
蓋緊管蓋:防止離心過程中液體泄漏腐蝕轉(zhuǎn)子或電機。
預(yù)冷處理:若需低溫離心(如4℃分離蛋白質(zhì)),提前將轉(zhuǎn)子與離心管置于冰箱預(yù)冷。
降速停止:離心結(jié)束后等待轉(zhuǎn)子自然停止,勿強行制動,防止樣品重新懸浮。
總結(jié):低速離心機的科學(xué)使用需結(jié)合樣品特性(顆粒大小、密度)、分離目標(純度、回收率)及轉(zhuǎn)子類型綜合決策。建議通過預(yù)實驗優(yōu)化轉(zhuǎn)速-時間組合,并嚴格遵循設(shè)備說明書中的轉(zhuǎn)速與轉(zhuǎn)子匹配要求,以確保實驗結(jié)果可靠性與設(shè)備安全性。